Congelación del semen de cerdo

Alejandro Córdova Izquierdo
Adrián E. Iglesias Reyes
Juan Eulogio Guerra Liera
Edmundo Abel Villa Mancera
Ma. de Lourdes Juárez Mosqueda
Armando Gómez Vázquez
Pedro Sánchez Aparico
Carlos J. Bedolla Cedeño
Jaime Olivares Pérez
Raúl Sánchez Sánchez.

La criopreservación o congelación seminal, se puede definir como la congelación y almacenamiento de espermatozoides con fines reproductivos, durante largos periodos de tiempo, frenando procesos de envejecimiento y degeneración celular, manteniendo su viabilidad y funcionalidad a bajas temperaturas (-196°C) (Jiménez et al., 2014).

Durante el proceso de criopreservación, hay un gran número de factores que pueden afectar a nivel estructural y/o funcional la capacidad fecundante de los espermatozoides de verraco, por lo que todavía no existe un método de criopreservación espermática universalmente aceptado, que logre las tasas de criosupervivencia y fecundación artificial esperadas. Es por ello, que las células se tienen que exponer a diluyentes con agentes crioprotectores permeables y no permeables, que eviten la formación de cristales de hielo y el daño de la membrana plasmática, sin embargo, los crioprotectores pueden igualmente tener efectos diversos sobre los espermatozoides, lo cual limita su función (Restrepo et al., 2009; Jiménez et al., 2014). Por lo que, la técnica que se muestra a continuación, es una de las que mejores resultados han obtenido manteniendo la motilidad, viabilidad y NAR de los espermatozoides de verraco, congelado-descongelado.

Material necesario para conservación en congelación del semen de cerdo

• Pajillas de 0.5 o 0.25 ml.
• Primer diluyente (Diluyente A), 0.76 g de Dextrosa, 4 ml de yema de huevo, 0.2 ml de Gentamicina y 20 ml de Agua destilada (cbp).
• Segundo diluyente (Diluyente B) 0.76 g de Dextrosa, 4 ml de yema de huevo, 0.2 ml de Gentamicina, 20 ml de Agua destilada (cbp) y 0.6 ml de Glicerol.
• Potenciómetro.
• Centrifuga.
• Bortex.
• Tubos de Falcón.
• Gasas.
• Refrigerador.
• Hielera de unicel.
• Nitrógeno líquido.
• Tanque de nitrógeno líquido.

 

Protocolo para congelar semen de cerdo

La técnica de congelación de semen de verraco que se describe a continuación es el método descrito por Westendorf et al., (1975), con algunas modificaciones de Córdova, (2006), Gutiérrez, (2009) e Iglesias, (2019); el protocolo de congelación se puede realizar con pajillas de 0.5 ml o 0.25 ml.

Es necesario preparar el mismo día de la congelación, dos diluyentes para almacenamiento del semen (diluyente de refrigeración (A) y diluyente de congelación (B)) siguiendo la fórmula del cuadro 1:

Congelación del semen de cerdo semen congelacion cerdos

Esta preparación es para tener un total de 20 ml de cada diluyente.

1. Antes de comenzar la preparación de los diluyentes, almacenar gasas mojadas en un balde con agua a 15°C y colocar a 5°C pajillas, agua corriente, sanitas, peine, alcohol polivinílico y gobeletes, todo el material se deberá mantener a esa temperatura hasta su uso.Congelación del semen de cerdo semen congelacion cerdos 2

2. Ajustar el pH de ambos diluyentes a 6.8-7.4 (de preferencia a 7.1) (Figura A).

3. Centrifugar ambos diluyentes a 800 g (1500 rpm) durante 10 min, recuperando el sobrenadante y desechando la pastilla (Figura B).

4. Conservar ambos diluyentes hasta su uso a las temperaturas mencionadas en el Cuadro 1.

5. Preparar la muestra espermática, con respecto a la concentración y número de pajillas deseadas.

6. Centrifugar la muestra espermática a 800 g (1500 rpm) durante 10 minutos.

7. Quitar sobrenadante y conservar la pastilla o paquete espermático (Figura C).

8. Colocar el diluyente A en el paquete espermático, homogenizarlo a pipeteo muy lento y cerciorarse que haya sido bien homogenizado (a esta combinación se le llamará “muestra A”).

9. Envolver con las gasas almacenadas a 15°C, el tubo que contiene la muestra A (Figura D).

10. Colocar la muestra A, en el contenedor de plástico donde se almacenaron las gasas mojadas y verter agua hasta alcanzar el nivel del tubo donde está la muestra A (Figura E).

11. Dejar almacenada la muestra A durante 1.5 horas a 15°C.

12. Pasadas las 1.5 horas, colocar la muestra A en refrigeración a una temperatura de 5°C durante 2 horas.

13. Después de las 2 horas, colocar en la muestra A el 50% que corresponde del diluyente B y pipetear suavemente (a esta combinación se le llamará “muestra de congelación”) (en caso de tener varios tubos con muestra, es importante siempre cambiar la pipeta o las puntas por muestra); nunca sacar la muestra A y el diluyente B del refrigerador, todo el procedimiento se hace donde se tengan los 5°C.

14. Dejar reposar la muestra de congelación durante 20 min a una temperatura de 5°C.

15. Pasados los 20 min, colocar el otro 50% de la muestra B y pipetear suavemente (siguiendo la misma metodología del punto 13).

16. Dejar reposar la muestra de congelación durante 20 min a una temperatura de 5°C.

17. Transcurridos los 20 min, evaluar la motilidad de la muestra de congelación sin sacarla de los 5°C, si la muestra tiene un mínimo de 70% de motilidad, proseguir con la congelación.

18. El llenado de las pajillas (Figura F) se hará por aspiración manual siguiendo los pasos:

a. Colocar la pajilla dentro de la muestra de congelación y absorber con la boca desde el extremo donde está el algodón de la pajilla.
b. Es importante intentar nunca tocar el centro de la pajilla con los dedos, ni formar burbujas de aire en la pajilla.
c. Una vez que la pajilla se llene, con ayuda del peine hacer la burbuja que separe el sello de alcohol polivinílico y la muestra espermática.
d. Sellar la pajilla con alcohol polivinílico, para cerciorarse de que esté bien sellado, se sugiere que en la parte del sello se coloque un poco de agua y se vuelva a poner alcohol polivinílico, es importante siempre limpiar alrededor del sello de la pajilla con las sanitas.
e. Mantener las pajillas a 5°C hasta terminar el empajillado.
f. Situar las pajillas en los gobeletes que se almacenaron a 5°C, es importante nunca llenar por completo los gobeletes, siempre dejando de 2 a 3 espacios vacíos.

Congelación del semen de cerdo semen congelacion cerdos 4

19. Colocar los gobeletes con las pajillas a vapores de nitrógeno líquido durante 20 min; para realizar este paso, se pueden colocar los gobeletes a 5 cm de distancia de la fase líquida del nitrógeno en un contenedor de boca ancha de unicel y taparla durante 20 min (Figura G).

20. Pasado el tiempo, sumergir los gobeletes y los bastones en nitrógeno líquido a -196°C (Figura H1 y H2).

21. Dentro del nitrógeno líquido, se colocarán los gobeletes en los bastones.

22. Una vez llenos los bastones, se colocarán en el tanque de nitrógeno líquido, donde se almacenarán las pajillas hasta su uso (Figura I).

Bibliografía

  • Carneiro, J. A. M., Canisso, I. F., Bandeira, R. S., Scheeren, V. F. C., Freitas Dell´Aqua, C. P., Alvarenga, M. A., Papa, F. O., y Dell´Aqua, J. J. A. 2018. Effects of coenzyme Q10 on semen cryopreservation of stallions classified as having Good or bad semen freezing ability. Animal Reproduction Science, 192, 107-118. https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2018.02.020
  • Córdova, I. A., Iglesias, R. A. E., Espinosa, C. R., Guerra, L. J. E., Villa, M. A. E., Huerta, C. R., Juárez, M. M. L., Méndez, H. W., Sánchez, A. P., y Rodríguez, D. B. E. 2017. Effect of addition of antioxidants in the extender to freeze boar in two types of straws on sperm quality. International Journal of Recent Scientific Research, 8 (6), 17466-17468. DOI: http://dx.doi.org/10.24327/ijrsr.2017.0806.0360
  • Córdova, I. A., Oliva, J. H., Lleó, B., García, A. C., Corcuera, B. D., y Pérez, G. J. F. 2006. Effect of different thawing temperatures on the viability, in vitro fertilizing capacity and chromatin condensation of frozen boar semen packaged in 5 ml straws. Animal Reproduction Science, 92, 145-154. https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2005.05.011
  • Gutiérrez, P. O., Juárez, M. M. L., Uribe, C. S., y Trujillo, O. M. E. 2009. Boar spermatozoa cryopreservation in low glicerol/trehalose enriched freezing media improves cellular integrity. Cryobiology, 59, 287-292. https://doi.org/10.1016/j.cryobiol.2009.02.003
  • Iglesias Reyes, A. E. 2019. Efecto de la adición de quercetina y α-tocoferol al diluyente para la congelación del semen de verraco sobre la calidad espermática, [Tesis de Maestría, Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco].
  • Jiménez, M. I., Serrano, M. G., y Moreno, J. M. 2014. Técnicas de criopreservación animal. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, 2011 (3), 34-39. http://www.seqc.es/download/doc/13/2791/7795813/275647/cms/tecnicas-para-la-preparacion-de-semen-en-reproduccion-asistida-2009.pdf/
  • Restrepo, B. G., Vásquez, A. N., y García, E. A. 2009. Criopreservación de semen canino y su aplicación en la inseminación artificial. Revista CES, 4 (2), 119-122. https://www.redalyc.org/pdf/3214/321428102012.pdf
  • Restrepo, B. G., y Rojano, B. A. 2018. Actividad antioxidante del isoespintanol y el timol en el semen equino criopreservado. Revista de Investigaciones Veterinarias de Perú, 29 (1) 205-216. https://dx.doi.org/10.15381/rivep.v29i1.14253
  • Thongrueang, N., Chaibangyang, N., Chanapiwat, P., y Kaeoket, K. 2017. Effects of adding melatonin on the quality of frozen-thawed boar semen. Journal of Applied Animal Science, 10 (2), 47-56. https://pdfs.semanticscholar.org/df5a/54b1346eb710fa8ccd27be7c87e8dde7a905.pdf?_ga=2.165567935.1638286736.1599421297-985429258.1599421297
  • Westendorf, P., Richeter, L., y Treu, H. 1975. Zur tiefgefrierung von ebersperma Laborund Besamungsergebnisse mit dem Hulsengerger Pailletten-Verfahren. Deutsche Tierarzt Wochenschr, 82, 261-300.
  • Williams, S. 2013. Criopreservación de semen porcino: desafíos y perspectivas. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 37 (2), 207-2012 https://docplayer.es/49414178-Criopreservacion-de-semen-porcino-desafios-y-perspectivas-swine-semen-cryopreservation-challanges-and-perspectives.html
  • Yeste, M., Rodríguez, G. J. E., y Bonet. S. 2017. Artificial insemination with frozen-thawed boar sperm. Molecular Reproduction Development, 2017, 1-12. https://doi.org/10.1002/mrd.22840.

Artículo publicado en Los Porcicultores y su Entorno Septiembre- Octubre 2021

×
BM Editores We would like to show you notifications for the latest news and updates.
Descartar
Permitir Las Notificaciones